在培養(yǎng)細(xì)胞的時(shí)候?yàn)槭裁匆靡鹊鞍酌?？胰蛋白酶起到?p>1.吸去培養(yǎng)液，用無(wú)菌的PBS、Hanks液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。
2.加入少量胰蛋白酶消化液，蓋過(guò)細(xì)胞即可，室溫放置1-2分鐘。不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同，對(duì)于貼壁牢固的細(xì)胞可適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間。
3.顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái)。此時(shí)吸除消化液。加入含血清的細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
4.如果發(fā)現(xiàn)消化不足，可加入胰蛋白酶消化液重新消化。
5.如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落，直接用胰酶細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。1000-2000g離心1分鐘，沉淀細(xì)胞，盡量去除胰酶細(xì)胞消化液后，加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
胰蛋白酶為蛋白酶的一種，是從牛、羊、豬的胰臟中所提取的一種絲氨酸達(dá)標(biāo)水解酶。它不僅起到消化酶的作用，還能限制分解糜蛋白酶原、磷脂酶等其它酶的前體，起活化作用。在細(xì)胞培養(yǎng)中，胰蛋白酶的作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散。不同的組織或者細(xì)胞對(duì)胰酶的反應(yīng)是不一樣的，分散細(xì)胞的活性還要與其的濃度、溫度和時(shí)間有關(guān)。在pH值8.0、溫度為37℃的條件下是胰酶分散細(xì)胞的作用能力zui強(qiáng)。
 

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