為提高含高GC含量或連續(xù)多個A/T的復雜基因的PCR擴增效率及擴增特異性,科研人員通常會嘗試在PCR反應體系中添加增效劑。翊圣生物現(xiàn)為廣大科研人員提供質量高、適用性廣的兩種PCR增效劑:甜菜堿與海藻糖。
其中,海藻糖(Trehalose)是一種雙糖,能夠在高溫、高寒、干燥失水等惡劣的條件下在細胞表面形成特殊的保護膜,有效的保護生物分子結構不被破壞,從而維持生命體的生命過程和生物特征。翊圣生物提供的海藻糖,為海藻糖水合物,分子式為C12H22O11 2H2O,純度 99%,金屬離子含量低,可用于分子生物學實驗。
產品介紹
翊圣生物是在工具酶及其反應輔助試劑方面經驗,確保原裝進口高品質海藻糖,并大量現(xiàn)貨,可保證批次間產品的穩(wěn)定性。該產品可作為酶保護劑,用于DNA聚合酶、逆轉錄酶等工具酶的穩(wěn)定劑,因此作為PCR、RT-PCR、qPCR等實驗反應優(yōu)化的添加劑成分,大大改善擴增效率和擴增特異性、改善逆轉錄效率等。
海藻糖特點
1. 海藻糖具有熱穩(wěn)定性和熱激活特性。海藻糖在蛋白熱變性過程中可維持蛋白的骨架,保持其天然結構。在分子生物學多種酶促反應中得到驗證,如逆轉錄酶參與的cDNA合成,Dnase I參與的DNA降解,限制性內切酶的酶切反應等[1]。
2. 海藻糖可作為PCR增強劑。通過降低DNA雙鏈融解溫度,維持Taq DNA聚合酶穩(wěn)定性,提高PCR反應效率[2]。
3. 海藻糖可中和抑制劑對DNA聚合酶的抑制作用,維持PCR擴增效率。海藻糖作為SYBR Green I法實時熒光定量PCR添加劑,有效降低SYBR Green I對PCR的抑制[3]。
4. 海藻糖可作為樣本基因組或極低濃度基因組的保存劑[4]。
圖1. 海藻糖可保護Taq DNA聚合酶酶活性,提升PCR擴增性能
數(shù)據(jù)來源DOI: 10.1373/clinchem.2004.031336 Published June 2004
主要應用
1. 作為酶穩(wěn)定劑,維持酶的活性及熱活化后的酶活性。
2. 可應用于DNA的測序反應實驗中,提升含有重復序列(連續(xù)多個A或T)的測序性。
3. 復雜模板的PCR擴增,如高GC含量的樣本。
4. 適用于較長cDNA的逆轉錄反應,尤其是全長cDNA的合成,提升文庫建立的覆蓋度。
5. 微量DNA樣品的保存劑。
6. qRT-PCR反應體系添加劑,提升反應性能。
溶液配制
溶于水。50mg/ml。
海藻糖參數(shù)
中文別名(Chinese Synonym)
, -海藻糖, -D-吡喃葡萄糖基- -D-吡喃葡萄糖苷
英文別名(English Synonym)
alpha-D-Glucopyranosyl-alpha-D-glucopyranoside; Mycose
CAS 號(CAS NO.)
6138-23-4
分子式(Molecular Formula)C12H22O11 2H2O
分子量(Molecular Weight)378.33g/mol
外觀(Appearance)
白色或灰白色粉末
溶解性(Solubility)
溶于水
純度(Purity)
99%
結構式(Structure)
參考文獻
[1]. Butler SL,Falke JJ. Effects of protein stabilizing agents on thermal backbone motions: a disulfide trapping study. Biochemistry.1996 Aug 20;35(33):10595-600.
[2]. Spiess AN,Mueller N,Ivell R. Trehalose is a potent PCR enhancer: lowering of DNA melting temperature and thermal stabilization of taq polymerase by the disaccharide trehalose. Clin Chem.2004 Jul;50(7):1256-9.
[3]. Hor kov H.1,2-propanediol-trehalose mixture as a potent quantitative real-time PCR enhancer.BMC Biotechnol.2011 Apr 18;11:41. doi: 10.1186/1472-6750-11-41.
[4]. Smith S,Morin PA.Optimal storage conditions for highly dilute DNA samples: a role for trehalose as a preserving agent.J Forensic Sci.2005 Sep;50(5):1101-8.
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