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人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞,HTR-8/SVneo-91化工儀器網(wǎng)

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放大字體  縮小字體    發(fā)布日期:2019-09-03  來源:儀器信息網(wǎng)  作者:Mr liao  瀏覽次數(shù):1001
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人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞,HTR-8/SVneo 上海雅吉生物科技有限公司

價格:¥2800元

生產(chǎn)地:上海市松江科技園品牌:雅吉生物

移動電話:15821073967公司傳真:021-34661275

更新時間:2018-06-04



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    免疫組化試劑盒,Elisa試劑盒:大鼠Elisa試劑盒,小鼠Elisa試劑盒,人Elisa試劑盒,犬Elisa試劑盒,魚Elisa試劑盒,雞Elisa試劑盒,牛Elisa試劑盒、其他動物類Elisa試劑盒、植物Elisa試劑盒、分子生物學(xué)試劑盒、 免疫組化試劑盒、金標(biāo)檢測試劑盒、生化試劑盒、細(xì)胞凋亡試劑盒。
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     細(xì)胞:原裝進(jìn)口細(xì)胞、正常細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、腫瘤耐藥細(xì)胞。細(xì)胞:原裝進(jìn)口細(xì)胞、正常細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、腫瘤耐藥細(xì)胞。
     歡迎新老客戶前來咨詢訂購,我們將竭誠為您服務(wù)。


生長特性:貼壁,懸浮,半懸浮半貼壁
培養(yǎng)條件:640+10%FBS+1%雙抗

溫度:37℃
空氣條件:5% CO2,,95% AIR
傳代方法:1:2傳代,2~3天換液
凍存條件:90%FBS+10%DMSO

人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞,HTR-8/SVneo 操作說明

請仔細(xì)閱讀本操作說明及相應(yīng)的細(xì)胞說明書。
收貨
1 本公司的人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞,HTR-8/SVneo 發(fā)貨有四種形式:T25瓶、離心管、血清及干冰。
T25是用T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶直接發(fā)貨的形式。收到細(xì)胞后,拆開包裝T25瓶的自封袋,不拆封口膜,表面噴75%酒精消毒后顯微鏡觀察細(xì)胞狀態(tài)(有條件可以拍下此時細(xì)胞照片)。將細(xì)胞放入37度培養(yǎng)箱平衡兩小時以上,再處理細(xì)胞。首先將T25中培養(yǎng)基取出裝好備用,如細(xì)胞密度高于80%,可以直接消化傳代,相反則加入5-6mL培養(yǎng)基放回培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)即可。
離心管是用15mL離心管發(fā)貨的方式,只用于懸浮細(xì)胞發(fā)貨。收到細(xì)胞后消毒處理及平衡參考上述T25瓶。平衡完成后,離心(1000rpm,3min)收集細(xì)胞,棄上清,用新的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞并接種至培養(yǎng)瓶或皿中,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。
血清是用牛血清直接發(fā)貨的形式,是細(xì)胞凍存管加入含有細(xì)胞的牛血清的形式。收到細(xì)胞后,拆開自封袋,凍存管表面噴75%酒精消毒后,在超凈臺中打開凍存管,將細(xì)胞用1mL槍頭輕輕幾次以將細(xì)胞吹勻,接種至含有預(yù)熱的培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶或皿中,顯微鏡下觀察細(xì)胞是否吹勻,如果沒有吹勻,繼續(xù)吹勻至3-5個細(xì)胞一團(tuán),放回培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。
干冰是用本公司凍存液凍存細(xì)胞后,直接用干冰將凍存的細(xì)胞冷凍發(fā)貨的形式。收到細(xì)胞后按照細(xì)胞復(fù)蘇的步驟操作即可。
2 相關(guān)問題
如不能在收到 后及時操作細(xì)胞,T25及離心管發(fā)貨的細(xì)胞可以消毒后在37度過夜,血清發(fā)貨的細(xì)胞可以在室溫下靜置1-2天(注意不要放冰箱),干冰發(fā)貨的可以在確認(rèn)干冰未完全升華時將細(xì)胞直接放回液氮或者-80度冰箱,若干冰完全升華,請即刻復(fù)蘇細(xì)胞。
T25瓶及離心管在培養(yǎng)箱平衡是為了讓細(xì)胞盡快適應(yīng)培養(yǎng)箱環(huán)境,同時使部分因運(yùn)輸導(dǎo)致脫落的細(xì)胞貼壁,此步驟非常必要。T25瓶如果在顯微鏡下可以看到部分不貼壁的細(xì)胞,可以收集上清后離心(1200rpm,5min)后,將沉淀用新的培養(yǎng)基重懸后接種至新的培養(yǎng)瓶或皿中。
部分細(xì)胞在運(yùn)輸過程中,由于不斷震蕩及環(huán)境不適,可能導(dǎo)致細(xì)胞破碎死亡,從而使培養(yǎng)基中漂浮很多細(xì)胞碎片及顆粒狀物質(zhì)。這種情況下,平衡后,貼壁細(xì)胞用PBS洗兩遍在加新的培養(yǎng)基培養(yǎng)或者傳代至新瓶中培養(yǎng)即可;懸浮細(xì)胞可以離心(1000rpm,3min)收集細(xì)胞,并用PBS重懸后再離心一次,再用新的培養(yǎng)基重懸并接種細(xì)胞。

細(xì)胞培養(yǎng)及傳代
1 細(xì)胞培養(yǎng)
細(xì)胞請于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),大部分細(xì)胞是37℃,5% CO2,濕度100%環(huán)境下培養(yǎng)的。有極少部分細(xì)胞培養(yǎng)條件不一致,請仔細(xì)閱讀相應(yīng)的細(xì)胞說明書,使用正確的培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件;
細(xì)胞于培養(yǎng)瓶或皿中培養(yǎng),加入適量說明書上標(biāo)注的細(xì)胞相應(yīng)完全培養(yǎng)基(一般液面高度2-3mm即可)。
2 細(xì)胞傳代(以下步驟適用于10cm皿)
細(xì)胞培養(yǎng)至密度達(dá)80%以上時即可傳代,先將細(xì)胞培養(yǎng)基取出3mL用15mL離心管裝好,其他培養(yǎng)基全部吸干舍棄;
培養(yǎng)皿加入2-3mL無菌PBS,輕輕晃動皿,使PBS浸洗到皿底所有部位,PBS吸干舍棄;
加入1mL胰酶,輕輕晃動皿,使胰酶浸沒到皿底所有部位,將皿蓋好放入培養(yǎng)箱中消化;
3min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞不再貼壁,即可加入*步收集的培養(yǎng)基混勻;
若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至不貼壁為止;
將細(xì)胞懸液均勻分成幾份,分別加入不同培養(yǎng)皿中,補(bǔ)加新培養(yǎng)基后放回培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
3 相關(guān)問題
部分細(xì)胞在傳代后時,會有以下現(xiàn)象:細(xì)胞內(nèi)會有黑色小點(diǎn)、細(xì)胞間隙有些顆粒物、培養(yǎng)基漂浮一些死細(xì)胞或者細(xì)胞長的極慢。出現(xiàn)以上現(xiàn)象時,可以咨詢本公司技術(shù)人員此現(xiàn)象是否正常及相關(guān)處理方式,不要頻繁換液,大多數(shù)細(xì)胞1周換液2-3次即可。
細(xì)胞碎片較多、背景較臟時,貼壁細(xì)胞用PBS漂洗兩次、懸浮細(xì)胞打散后低速離心(900rpm,3min)能有效改善。
傳代比例建議1:2-1:3,長得比較快的細(xì)胞可以1:3,比較慢的按1:2傳代。傳代后,建議不要使用傳代前培養(yǎng)所使用的培養(yǎng)基,會有大量細(xì)胞碎片甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡的風(fēng)險。
細(xì)胞狀態(tài)不好或者生長極慢的時候,可以通過增加血清濃度調(diào)整細(xì)胞狀態(tài)及生長速度。
請不要隨意更換培養(yǎng)基,因?qū)嶒?yàn)需要,可以逐步馴化。
懸浮傳代:混勻細(xì)胞,收集細(xì)胞懸液900-1000rpm離心3min,棄上清。再加5ml PBS重懸細(xì)胞,再離心后,用完全培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片,如果平時碎片比較少,傳代時可以省略PBS重懸的步驟;如果碎片很多,建議PBS多洗一次。
細(xì)胞凍存
1 凍存操作
凍存液配方:建議使用92%FBS+8%DMSO,客戶自身實(shí)驗(yàn)室所使用的凍存液也可以適用,血清濃度不低于30%,DMSO含量不高于12%即可。
收集細(xì)胞按照以上細(xì)胞傳代步驟操作至第④步后,將細(xì)胞懸液收集入15mL離心管,離心(1200rpm,3min);
棄上清,加入配制好的凍存液,重懸細(xì)胞,懸液加入無菌凍存管中;
將凍存管在4℃靜置10min,后將之正置于室溫下的厚壁有蓋泡沫盒中,蓋緊盒蓋,放入-80℃冰箱過夜,第二天放入液氮即可長期保存。
2 相關(guān)問題
10cm皿的細(xì)胞長滿一般可以凍存2-3管,部分細(xì)胞長的比較慢,凍存的細(xì)胞密度要稍微大點(diǎn),以防止復(fù)蘇后生長困難。
凍存液中含的DMSO請使用細(xì)胞級DMSO,同時濃度不要太高。部分細(xì)胞在10%DMSO條件下凍存會死亡,所以DMSO濃度5%-8%是比較推薦的濃度。
細(xì)胞凍存及復(fù)蘇遵循慢凍快融的原則,即凍存時溫度不能急劇下降,應(yīng)控制溫度緩慢下降。復(fù)蘇時應(yīng)快速融化,融化后盡快加入培養(yǎng)基中。
凍存時建議設(shè)置凍存檢測,即取0.2-0.3mL的凍存液重懸的細(xì)胞于一個凍存管中,與正常體積凍存的細(xì)胞共同凍存,至液氮后復(fù)蘇檢查凍存結(jié)果。凍檢合格前,留一部分細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng),以防萬一。
 復(fù)蘇
1 復(fù)蘇步驟
將凍存細(xì)胞從液氮中取出后迅速放入37℃溫水中搖晃融化,時間1min左右;
于1000rpm離心1min,棄凍存液,加入1mL新的完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞;
接種至新培養(yǎng)瓶或皿中,補(bǔ)加足量完全培養(yǎng)基,放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
2 相關(guān)問題
復(fù)蘇過程應(yīng)迅速操作,時間不能太長。
復(fù)蘇過程中注意污染,小心操作。

細(xì)胞培養(yǎng)需要耐心與細(xì)心,希望您能獲得一個滿意結(jié)果!

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