亚洲欧美日本韩国_久久久久亚洲AV片无码V_亚洲AV片不卡无码一_H漫全彩纯肉无码网站

 
 
當(dāng)前位置: 首頁(yè) » 新聞資訊 » 廠商 » 正文

原位聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)與原位反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)操作規(guī)程_91化工儀器網(wǎng)

分享到:
放大字體  縮小字體    發(fā)布日期:2019-09-03  來源:儀器信息網(wǎng)  作者:Mr liao  瀏覽次數(shù):876
核心提示:原位聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(in situ PCR)和原位反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(in situ RT-PCR)操作規(guī)程(一)、儀器設(shè)備英國(guó)Thermo Hybaid原位PCR儀。(二)、操作流程1、原位PCR步驟1)預(yù)處理:(1)切片常規(guī)脫蠟;(2)0.2mol/L HCl處理10min;(3)5 g/ml蛋白酶k消化組織37℃10min;(4)Nase消化組織37℃ 30min;(5)梯度酒精脫水,室溫干燥。2)原位擴(kuò)增:(1)切片滴加特異性序列引物30 Lpcr擴(kuò)增反應(yīng)液,覆蓋硅化蓋玻片,石蠟油封邊;(2)P

原位聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(in situ PCR)和原位反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(in situ RT-PCR)操作規(guī)程 

(一)、儀器設(shè)備 
英國(guó)Thermo Hybaid原位PCR儀。 

(二)、操作流程 
1、原位PCR步驟 
1)預(yù)處理: 
(1)切片常規(guī)脫蠟; 
(2)0.2mol/L HCl處理10min; 
(3)5 g/ml蛋白酶k消化組織37℃10min; 
(4)Nase消化組織37℃ 30min; 
(5)梯度酒精脫水,室溫干燥。 
2)原位擴(kuò)增: 
(1)切片滴加特異性序列引物30 Lpcr擴(kuò)增反應(yīng)液,覆蓋硅化蓋玻片,石蠟油封邊; 
(2)PCR熱循環(huán):94℃,1min;55℃,1min;72℃,1.5min,共25~30個(gè)循環(huán),72℃延伸10min; 
(3)氯洗去蓋玻片,4%多聚甲醛后固定10min,梯度酒精脫水,干燥。 
3) 原位雜交: 
(1)加地高辛標(biāo)記探針的雜交液,98℃變性10min,-20℃退火5min,42℃雜交過夜。 
(2)雜交后用2 SSC洗滌10min,3次,1 SSC洗滌10min,3次; 
(3)緩沖液洗滌10min,3次; 
(4)加堿性磷酸酶標(biāo)記的羊抗地高辛抗體復(fù)合物,37℃,2h; 
(5)緩沖液洗滌5min,3次; 
(6)NBT、BCIP暗處顯色,鏡下控制,終止顯色。 
(7)常規(guī)脫水:透明、封固。 
2、原位RT-PCR步驟 
1)預(yù)處理: 
(1)蛋白酶K(0.3mg/mL) 54℃消化20min,蒸餾水洗; 
(2)95℃加熱3min,滅活殘存的蛋白酶。 
2)原位擴(kuò)增: 
(1)在有RNA酶抑制劑存在的條件下,用隨機(jī)六聚物進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng); 
(2)用熱啟動(dòng)法進(jìn)行PCR擴(kuò)增。標(biāo)本加熱至75℃時(shí)加上反應(yīng)液,覆以蓋玻片,四周用指甲油密封。然后將溫度升至95℃,2min。再將熱循環(huán)儀設(shè)定為95℃,45s,55℃,1min和75℃,45s,共26次循環(huán); 
(3)擴(kuò)增結(jié)束后,在80℃烤15min~30min。 
3)原位雜交: 
(1)雜交前標(biāo)本95℃加熱3min; 
(2)加上雜交液,濕盒內(nèi)50℃過夜;雜交液組成:25%硫酸葡聚糖,2 SSC,50%甲酰胺,0.33mg/ml變性的鮭魚精子DNA, 每0.5mL雜交液內(nèi)含生物素標(biāo)記探針1ng。 
(3)擴(kuò)增的 -肌動(dòng)蛋白和IL-6用DAKO檢測(cè)試劑盒K600(鏈霉卵白素,生物素標(biāo)記的堿性磷酸酶和硝基四氮唑藍(lán))檢測(cè)。陽性反應(yīng)呈紫色。


關(guān)注本網(wǎng)官方微信 隨時(shí)閱讀專業(yè)資訊

 
 
打賞
[ 新聞資訊搜索 ]  [ 加入收藏 ]  [ 告訴好友 ]  [ 打印本文 ]  [ 違規(guī)舉報(bào) ]  [ 關(guān)閉窗口 ]
免責(zé)聲明:
本網(wǎng)站部分內(nèi)容來源于合作媒體、企業(yè)機(jī)構(gòu)、網(wǎng)友提供和互聯(lián)網(wǎng)的公開資料等,僅供參考。本網(wǎng)站對(duì)站內(nèi)所有資訊的內(nèi)容、觀點(diǎn)保持中立,不對(duì)內(nèi)容的準(zhǔn)確性、可靠性或完整性提供任何明示或暗示的保證。如果有侵權(quán)等問題,請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系我們,我們將在收到通知后第一時(shí)間妥善處理該部分內(nèi)容。
 

原位聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)與原位反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)操作規(guī)程_91化工儀器網(wǎng)二維碼

掃掃二維碼用手機(jī)關(guān)注本條新聞報(bào)道也可關(guān)注本站官方微信賬號(hào):"xxxxx",每日獲得互聯(lián)網(wǎng)最前沿資訊,熱點(diǎn)產(chǎn)品深度分析!
 

 
0相關(guān)評(píng)論

 
日韩精品人妻系列无码专区 | 精品无码一区二区三区亚洲桃色 | 精品人妻中文字幕有码在线 | 欧美孕妇变态孕交粗暴| 中文无码一区二区三区在线观看 | 中文精品久久久久国产网址| 全黄激性性视频| 三年片大全在线观看免费观看大全| 香蕉久久av一区二区三区| 特级a欧美做爰片第一次| 夜夜爽夜夜叫夜夜高潮漏水| 全球av集中精品导航福利| 精品乱人伦一区二区三区| 少妇特殊按摩高潮惨叫无码| 久久久久久久综合狠狠综合 | 人妻少妇-嫩草影院| 中文字幕有码无码人妻av蜜桃| 亚洲av无码成人精品区在线观看| 亚洲乱色伦图片区小说| 国语自产视频在线| 色欲麻豆国产福利精品| √天堂中文官网在线| 亚洲av无码兔费综合| 女人被爽到呻吟gif动态图视看| 无码人妻一区二区三区免费看| 亚洲av成人无码网站| 18禁真人抽搐一进一出在线| 国产综合精品一区二区三区| 国产山东熟女48嗷嗷叫| 99久久婷婷国产综合精品青草免费| 初尝人妻的滋味hd| 男人添女人下部高潮全视频| 久久99国产综合精品| 欧亚欧洲码国产| 日日摸夜夜添狠狠添欧美| 无码国产伦一区二区三区视频| 国产老熟女网站| 人妻色综合网站| 天天碰免费上传视频| 东北少妇不戴套对白第一次| 欧美白人战黑吊|