早期建立 iPS 細(xì)胞的方法為：利用逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)表達(dá) 4 個(gè) Yamanaka 因子, 然后將細(xì)胞在ES 細(xì)胞培養(yǎng)液中培養(yǎng), 再用抗性基因篩選多潛能性相關(guān)啟動(dòng)子的激活，如 Oct4 和 Nanog 啟動(dòng)子，在得到細(xì)胞形態(tài)相似的 iPS 細(xì)胞后，鑒定 iPS 細(xì)胞的多潛能性。這些方法構(gòu)建 iPS 細(xì)胞的效率很低, 細(xì)胞多潛能性不均一,而且有內(nèi)在安全問(wèn)題, 如病毒的插入突變 c-Myc 的致癌性, 使其仍無(wú)法應(yīng)用于臨床治療。為解決這些安全問(wèn)題和提高 iPS細(xì)胞建系的效率,人們從多方面改進(jìn)構(gòu)建 iPS 細(xì)胞。

1. 轉(zhuǎn)座子技術(shù)

    英國(guó)和加拿大科學(xué)家首次不用病毒載體培育出更安全的誘導(dǎo)多功能干（iPS 細(xì)胞)。他們的研究工作是以日本京都大學(xué)科學(xué)家山中伸彌等人兩年前開(kāi)拓的一種方法為基礎(chǔ)的。山中伸彌及其同事將 4 個(gè)基因植入皮膚細(xì)胞，使之被誘導(dǎo)為多功能干細(xì)胞，是干細(xì)胞研究的重大突破。不過(guò)，他們移植基因所用的載體是一種逆轉(zhuǎn)錄病毒，這就意味著這種方法可能會(huì)讓使用 iPS細(xì)胞的病人增加患癌癥的風(fēng)險(xiǎn)。為了避免這一技術(shù)缺陷，此次英國(guó)和加拿大科學(xué)家使用的是轉(zhuǎn)基因作物領(lǐng)域常用的 轉(zhuǎn)座子 技術(shù)，它能把稱作 轉(zhuǎn)座子 的基因序列插入到目標(biāo)基因組中。研究人員利用老鼠和人類的皮膚細(xì)胞進(jìn)行了試驗(yàn)，結(jié)果顯示重組后的細(xì)胞株完全具備了胚胎干細(xì)胞的特征。

2. 減少癌變風(fēng)險(xiǎn)

    日本科學(xué)家僅用兩個(gè)移植基因培育成了人類誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞(iPS 細(xì)胞)，日本慶應(yīng)大學(xué)教授岡野榮之的研究小組，僅用先前培育 iPS 細(xì)胞所用 4 個(gè)誘導(dǎo)基因中的兩個(gè)，即 0ct3／4 基因和 Klf4k 基因，也成功培育出了 iPS 細(xì)胞。因?yàn)槌耸褂媚孓D(zhuǎn)錄病毒作為基因移植的載體這一因素外[17]，造成 iPS 細(xì)胞誘發(fā)癌癥風(fēng)險(xiǎn)的因素還與先前研究人員使用的 4 個(gè)誘導(dǎo)基因中的一個(gè)名為 C-Myc 的基因相關(guān)。所以日本科學(xué)家的方法也可以減少 iPS 細(xì)胞移植后的癌變風(fēng)險(xiǎn)。

3. 高效快速建立 iPS 細(xì)胞

    我國(guó)科學(xué)家從羊水細(xì)胞中快速建立人類 iPS 細(xì)胞。繼前不久在世界上首次得到完全由誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(即 iPS 細(xì)胞)發(fā)育的小鼠之后，我國(guó)科學(xué)家在 iPS 細(xì)胞研究領(lǐng)域又取得重大進(jìn)展：首次從孕婦產(chǎn)前的羊水細(xì)胞中高效快速建立 iPS 細(xì)胞，所需時(shí)間只有 6 天，為目前人類 iPS細(xì)胞相關(guān)報(bào)道中最短。最近在線發(fā)表于國(guó)際權(quán)威雜志《人類分子遺傳學(xué)雜志》上的這項(xiàng)成果，是由中科院上海生命科學(xué)院／上海交大醫(yī)學(xué)院健康科學(xué)研究所金穎研究員帶領(lǐng)的干細(xì)胞研究組與上海新華醫(yī)院陳方教授合作完成的。據(jù)金穎研究員介紹，此前科學(xué)家已經(jīng)成功地將小鼠、大鼠、獼猴、豬和人的體細(xì)胞誘導(dǎo)成為 iPS 細(xì)胞，誘導(dǎo)技術(shù)也產(chǎn)生了巨大革新，如減少外源轉(zhuǎn)錄因子的種類，使用非整合病毒，質(zhì)粒法等等。 目前關(guān)于人類誘導(dǎo)多能干細(xì)胞的研究還處于起步階段，所采用的供體細(xì)胞還僅僅局限在人包皮成纖維細(xì)胞、表皮細(xì)胞、毛囊細(xì)胞等少數(shù)細(xì)胞類型。更為棘手的是，這些細(xì)胞被重編程為 iPS 細(xì)胞所需要的時(shí)間比較長(zhǎng)(通常為 16～35 天)，且效率很低，這大大增加了在個(gè)過(guò)程中細(xì)胞的變異風(fēng)險(xiǎn)。 金穎說(shuō)， 因此，如何找到一種理想的人類體細(xì)胞來(lái)源，是全世界科學(xué)家的重點(diǎn)關(guān)注課題。 據(jù)介紹，博士研究生李春亮等在金穎研究員指導(dǎo)下，從孕婦產(chǎn)前診斷時(shí)剩余的羊水細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)一部分特殊類群，它們?cè)诓《窘閷?dǎo)的四種因子誘導(dǎo)下，感染后第二天發(fā)生形態(tài)上的顯著變化，第四天出現(xiàn)人胚胎干細(xì)胞類似形態(tài)的克隆，第六天就可以挑選后進(jìn)行建系。研究人員對(duì)建立的 8株人類誘導(dǎo)多能干細(xì)胞進(jìn)行進(jìn)一步鑒定后發(fā)現(xiàn)，這些細(xì)胞能夠長(zhǎng)期在體外穩(wěn)定傳代并保持體外長(zhǎng)期傳代核型正常，維持自我更新，蛋白和轉(zhuǎn)錄水平高表達(dá)全能性的標(biāo)志基因。誘導(dǎo)多能干細(xì)胞的主要應(yīng)用是分化和細(xì)胞移植。研究人員按照國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)嘗試了羊水細(xì)胞來(lái)源的 iPS細(xì)胞的體外、體內(nèi)分化潛能，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，iPS 細(xì)胞能夠分化成包括神經(jīng)前體細(xì)胞在內(nèi)的各種人體細(xì)胞。

4 iPS  細(xì)胞的安全性 有多少？

   iPS 研究先驅(qū)日本京都大學(xué)教授山中伸彌教授帶領(lǐng)團(tuán)隊(duì)在新一期《自然 生物技術(shù)》雜志上報(bào)告說(shuō)，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，用不同種類的體細(xì)胞培育出的誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞（iPS）移植后使實(shí)驗(yàn)鼠出現(xiàn)腫瘤的危險(xiǎn)性存在很大差異。研究人員分別利用小鼠胚胎的皮膚細(xì)胞、成年小鼠的胃細(xì)胞、尾巴的皮膚細(xì)胞以及肝臟細(xì)胞培育 iPS 細(xì)胞。利用不同的體細(xì)胞和培育方法，研究人員共培育出 36 種 iPS 細(xì)胞。接著，他們又使這 36 種 iPS 細(xì)胞都分化成具備演變成神經(jīng)能力的細(xì)胞，并把這些細(xì)胞植入另一些實(shí)驗(yàn)鼠的大腦。結(jié)果顯示，被植入分化細(xì)胞來(lái)自成年小鼠尾巴皮膚細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)鼠中有 83％體內(nèi)出現(xiàn)了腫瘤；被植入分化細(xì)胞來(lái)自于小鼠胚胎皮膚細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)鼠中只有 8％出現(xiàn)腫瘤；而如果實(shí)驗(yàn)鼠移植的分化細(xì)胞來(lái)自成年小鼠的胃細(xì)胞，其體內(nèi)沒(méi)有出現(xiàn)腫瘤。研究還發(fā)現(xiàn)，利用含有癌癥基因的體細(xì)胞培育 iPS，對(duì)腫瘤的發(fā)生幾率并無(wú)顯著影響。誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞能分化生成各種組織細(xì)胞，同時(shí)又回避了倫理問(wèn)題，被視為未來(lái)再生醫(yī)療的重要材料。上述研究表明，確保 iPS 細(xì)胞對(duì)治療的安全性，最重要的是選擇何種體細(xì)胞作為培育 iPS 細(xì)胞的原料。

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