購買現(xiàn)貨（復蘇或凍存）HK2細胞，細胞株供應商很多，但是選擇一個種類齊全，售后服務良好，傳代次數(shù)少，活力強，價格優(yōu)惠的供應商卻很少，素爾生物提供2000多種類細胞，從來源，引進，復蘇，凍存，培養(yǎng)，運輸，專注每一個細節(jié)，放心購買，更多促銷產(chǎn)品，大禮包相送請致電素爾客服部！

HK2細胞素爾生物為您介紹分析Western Blot中結果條帶的各種稀奇古怪。

啥也沒有

原因：比較多，如果單純一張沒有任何顯色的X光片，zui可能是一抗加成其他抗體，或者二抗種屬加錯了，比如兔的加成鼠的。

解決辦法：仔細檢查抗體是否加錯，確認轉膜沒有問題。

經(jīng)驗：上面的圖片展示的是一點信號都沒有，如果是這樣大部分情況是抗體加錯了。如果中間出現(xiàn)了細微的條帶，可能原因是蛋白上樣量太少，一抗?jié)舛冗^低，ECL發(fā)光液失效。另外如果轉膜出現(xiàn)了問題，比如膜放反了，自然是一個白片。

高背景

原因：封閉不夠好，一抗?jié)舛雀撸茨r間和次數(shù)不夠

解決辦法：降低一抗?jié)舛?，增加洗膜時間和次數(shù)。

經(jīng)驗：高背景可能是WB中zui常見出現(xiàn)的問題，目的條帶單一清晰，但是其他地方又彌漫性較為均一的背景（比較連續(xù)的）。其實只要我們注意操作規(guī)范，不偷工減料就很容易避免，洗膜按照規(guī)定來5min*5次或者10min*3次，不要改成5min*3次，或者10min*2次。

非特異性條帶

原因：一抗非特異性與蛋白結合

解決辦法：更換一抗

經(jīng)驗：此種情況絕大多數(shù)是因為一抗不好，你無法判斷那一條是目的條帶。如果實在沒有更好的抗體，建議采用陰性對照和陽性對照來確定上述哪個條帶是目的條帶。當然這種情況下有一種很小幾率的可能是一抗?jié)舛忍咭鸬姆翘禺愋越Y合。

條帶中出現(xiàn)邊緣規(guī)則的白圈

原因：電轉中膜和膠之間存在氣泡。

解決辦法：轉膜前去掉膜和膠之間的氣泡

經(jīng)驗：我們常常將電轉液倒入一個盤子里，倒入的液體不能太多也不能太少，zui好的高度是與放上*層濾紙齊平，然后往濾紙上澆點轉膜液，把電泳膠用清水清洗下，將電泳膠平鋪到濾紙上，仔細檢查濾紙與膠之間是否有氣泡，可以左右前后觀察，不同方向觀察之后確認無氣泡，然后再往膠上面澆點電轉液，用兩只手的拇指和食指輕輕夾住PVDF膜的兩側中間，使膜成U型，然后將U型的底部接觸膠的中間，慢慢往兩邊放下膜，這樣一般氣泡很少。然后上層濾紙同樣用U型的放置方法，用玻璃棒稍微貼實下，然后蓋上海綿。注意不要來回趕氣泡，這樣反而會帶入氣泡。

條帶中間出現(xiàn)白色（反白）

原因：中心部位高濃度HRP把底物消耗過快，中間部位底物消耗結束之后就不發(fā)光了

解決辦法：降低蛋白量，降低一抗和二抗的濃度。

經(jīng)驗：如果你足夠迅速，可以在中間部位底物消耗之前就把X光片給定影出來，但是時間很難把握，建議還是從降低蛋白量，降低一抗二抗?jié)舛热胧帧?/p>

出現(xiàn)黑點和黑斑

原因：膜上其他部位與一抗或者二抗非特異性結合

解決辦法：封閉牛奶一定要純，封閉結束之后要洗

經(jīng)驗：我們常常是等到要封閉的時候發(fā)現(xiàn)沒有牛奶，然后匆匆忙忙用PBST/TBST配置，配的匆忙的時候往往不管是否已經(jīng)完全溶解，如果沒有完全溶解的情況下加牛奶倒膜上，會導致很多不溶性顆粒附著在膜上，這就會導致發(fā)光時候膜上的黑點。所以牛奶溶解之后，zui好靜止一下，然后輕輕地吸取上層牛奶進行封閉，封閉結束之后一定要洗三遍之后再加一抗。

條帶拖尾

原因：蛋白量太大，一抗?jié)舛群蜁r間太長

解決辦法：根據(jù)情況調整蛋白量，同時一抗?jié)舛群蜁r間也可以縮短。

經(jīng)驗：這種情況很容易出現(xiàn)，因為很多原因都可能導致這一個結果。一般來說，蛋白量都是我們經(jīng)過很多次摸索得出的zui適蛋白量，因此不太可能是蛋白量過多引起的。zui有可能的是因為一抗?jié)舛忍?，作用時間太長引起的。另外洗一抗和洗二抗千萬不要偷工減漏，建議5min*5次，不要但是洗這么多次就把抗體和蛋白洗掉了，你又不是拿刀在上面刮，真正的抗原抗體的結合是通過這種方式洗不掉的。

出現(xiàn)重影

原因：熒光強度比較高，在壓片時，放好之后不小心又輕微移動了一段距離

解決辦法：X光片放上去之后，就不要動了，即使放歪了也沒關系。

經(jīng)驗：有的時候出現(xiàn)重新剛好在上下位置，并且重影會相對弱一些，不要誤以為抗體識別了該蛋白的另外一種異構形式。

出現(xiàn)非均一性背景

原因：膜可能曾經(jīng)干過

解決辦法：在每一步的操作過程中，都需要注意不要讓膜干

經(jīng)驗：在封閉的時候，洗一抗，洗二抗，以及發(fā)光的時候都時刻需要注意蛋白面不要風干，風干之后結果很可能就是這個樣子。注意與高背景區(qū)別。

某個條帶變形

原因：SDSPAGE膠中存在氣泡或者某不溶性顆粒

解決辦法：配膠過程中要小心，使用無雜質的液體。

經(jīng)驗：很多實驗室中使用的不是zui新的設備，比如配膠用的海綿墊，如果用了很多年之后，會從下面往上面漏小氣泡，當氣泡足夠小并且膠快凝固的時候，走到中間的小氣泡就停留在膠內，并會影響到后面的跑膠。另外配膠用的水，SDS，Tris緩沖液要注意不要有雜質。

條帶呈啞鈴狀

原因：配置膠有問題

解決辦法：把膠配好，不合格的膠堅決不用

經(jīng)驗：出現(xiàn)啞鈴zui大的可能是膠沒有配置好，膠凝固后不均一，不知道大家有沒有出現(xiàn)如下的配膠情況，下圖中示意拔完梳子之后的結果，如果你拔完梳子之后出現(xiàn)圖中下面部分的樣子，多半會出現(xiàn)啞鈴狀。另外還有一種可能是樣品中含有太多雜質，沒有離心下來，然后雜質沉積在孔的中間，蛋白自然被推擠到兩邊。

zui邊緣條帶彎曲

原因：電泳電流不均一

解決辦法：換用新的電泳槽； 不使用兩邊的兩孔

經(jīng)驗：一般我們使用的是10孔的的膠，如果你上樣剛好10個孔，那么zui兩頭的兩個孔肯定會歪曲。另外上樣zui好在膠的中間，這樣電場均一。

其他問題

（1）蛋白分子量偏高或者偏低?？赡苁悄z的濃度與目的蛋白的濃度不對應，比如說100KD的蛋白你用12%的膠跑，或者說20KD的蛋白你用6%的膠跑。

（2）蛋白質降解。蛋白質降解后很可能會在比原來位置低的地方出現(xiàn)主帶，然后會出現(xiàn)一些其他帶，zui主要特點是所有的條帶比正常的都低，并且條帶模糊不清晰。

（3）所有條帶連成一片沒有間隔。原因zui可能是上樣量過多，其次是樣品彌散（比如電泳長時間停止樣品彌散）。

電泳過程中出現(xiàn)現(xiàn)象及問題

（1）整個條帶呈 ︶ 狀：凝膠冷卻不均一，電泳槽老化。

（2）整個條帶呈 ︵ ： 凝膠左右兩頭沒有凝固好

（3）溴酚藍拖尾：樣品溶解不好。

（4）縱向的紋理：上樣樣品中存在不溶性顆粒

（5）溴酚藍很粗：濃縮膠濃縮效果不好，可能是濃縮膠太短，或者是濃縮膠配錯。

（6）在分離膠中跑不動：Tris-Cl PH值不對，或者忘記加SDS。

HK2細胞相關產(chǎn)品：

H2EL細胞，人胚胎成纖維細胞

M-20細胞，人胚胎成纖維細胞

M-22細胞，人胚胎成纖維細胞

M-7細胞，人胚胎成纖維細胞

HEL細胞，人胚胎肺成纖維細胞

FC33細胞，人胚胎腎（Asp-2基因修飾）細胞

HEH細胞，人胚胎心臟組織來源細胞

HFSF細胞，人胚胎眼鞏膜成纖維細胞

CRL-7601細胞，人皮膚成纖維細胞

HSF細胞，人皮膚成纖維細胞

ECV-304細胞，人臍靜脈內皮細胞

HUVE-12細胞，人臍靜脈內皮細胞

CRL-2922細胞，人臍靜脈融合細胞

EA.hy926細胞，人臍靜脈融合細胞

HUVEC(HUV-EC-C)細胞，人臍靜脈血管內皮細胞

HUVEC細胞，人臍靜脈血管內皮原代細胞

P69細胞，人前列腺上皮細胞

RWPE-1細胞，人前列腺上皮細胞

RWPE-2細胞，人前列腺正常細胞

HFF-P8細胞，人前皮膚成纖維細胞

HFF-P9細胞，人前皮膚成纖維細胞

CRL-2713細胞，人乳腺細胞

MDA-kb2細胞，人乳腺細胞

CRL-2190細胞，人腎近曲小管上皮細胞

HK2細胞，人腎近曲小管上皮細胞

HMC細胞，人腎小球系膜細胞

HEF 細胞，人食道組織來源細胞

RPE細胞，人視網(wǎng)膜色素上皮細胞

D407細胞，人視網(wǎng)膜色素上皮細胞

RPE細胞，人視網(wǎng)膜色素上皮細胞

ARPE-19細胞，人視網(wǎng)膜上皮細胞

 HPT-8 細胞，人飼養(yǎng)層上皮細胞

HFT-8810細胞，人胎兒胸腺株細胞

U266細胞，人外周淋巴細胞

IM-9細胞，人外周血B淋巴細胞

CCL-120細胞，人外周血淋巴細胞

MC/CAR細胞，人外周血淋巴細胞

KU812細胞，人外周血嗜堿性白細胞

GES-1細胞，人胃黏膜上皮永生系細胞

TEC細胞，人胸腺上皮細胞

VE 細胞，人血管內皮細胞

CRL-1999 T/G HA-VSMC細胞，人血管平滑肌細胞

T/G HA－VSMC細胞，人血管平滑肌細胞

HSC細胞，人血旺細胞

HGF-1細胞，人牙齦成纖維細胞

NP69-SV40T細胞，人永生化鼻咽上皮細胞

 HaCaT細胞，人永生化表皮細胞

Hacat細胞，人永生化角質形成細胞

HSPC-1細胞，人造血干細胞

Chang liver細胞，人張氏肝細胞

HBL-100細胞，人整合SV40基因的乳腺上皮細胞

WPMY-1細胞，人正常前列腺基質永生化細胞

HTB-125細胞，人正常乳腺細胞

Hs 578Bst細胞，人正常乳腺細胞

16HBE細胞，人支氣管上皮樣細胞

BEAS-2B細胞，人支氣管上皮樣細胞

HBE細胞，人支氣管上皮樣細胞

HA-VSMC細胞，人主動脈血管平滑肌細胞

T2細胞，人轉HLA-2基因B細胞

HPT-8細胞，人滋養(yǎng)層上皮細胞

WPMY-1細胞，人正常前列腺基質永生化細胞

RWPE-1細胞，人正常前列腺上皮細胞

MCF 10A細胞，人正常乳腺上皮細胞

關注本網(wǎng)官方微信 隨時閱讀專業(yè)資訊