流式細胞儀是現(xiàn)代細胞生物學(xué)家和免疫學(xué)家不可缺少的優(yōu)秀工具。它可以提供廣泛的信息，幫助研究人員識別各種細胞的物理和化學(xué)特征。作為一種用途極為廣泛的儀器，流式細胞儀有許多應(yīng)用，包括細胞計數(shù)、分選、活力、細胞凋亡檢測、膜電位甚至結(jié)合檢測等。但是其無法直接檢測分子間結(jié)合動力學(xué)，因此本文我們討論了流式細胞儀的應(yīng)用并演示如何使用我們的OpenSPR的LSPR技術(shù)對流式細胞儀的工作做革新，以更快的獲得發(fā)表文章所需的動力學(xué)數(shù)據(jù)。

流式細胞儀的工作原理

流式細胞儀是基于光學(xué)的儀器，通過流體系統(tǒng)、激光器、一系列光學(xué)濾波器和檢測器進行運作。將熒光標記的細胞懸浮液注射入儀器，細胞通過一個漏斗型流體瓶頸，將細胞變成單細胞流。然后，細胞通過激光照射的細胞檢測區(qū)，基于細胞內(nèi)的物理和/或化學(xué)特征，光被散射，細胞上的熒光團也被激發(fā)并向探測器發(fā)射，從而獲取細胞的熒光信號和光散射信號。細胞被激光檢測，它們要么直接被廢棄，要么被分類并進入收集管進行下游檢測。

從流式細胞儀可以得到的信息

流式細胞儀可以進行一系列的定量測量，包括細胞計數(shù)、分類、活力測定、凋亡檢測、膜電位和表面親和力檢測。重要的是，生物治療藥物已經(jīng)成為治療癌癥、免疫紊亂疾病等的主要研究領(lǐng)域。值得注意的是，靶向免疫細胞表面受體的候選生物療法具有獨特的結(jié)合特性，這是一個非常重要的需要量化的參數(shù)。有趣的是，一些非常常見的檢測可以用流式細胞儀進行，其可以從生物治療受體結(jié)合反應(yīng)中確定明顯的親和性。

受體占用率（RO）分析

受體占用實驗是一種高通量的方法，通過這種方法可以測量候選治療(或生物療法)之間的結(jié)合親和力。值得注意的是，RO分析包括兩個重要的 sub-assays 。第一個sub-assays ，熒光標記的非競爭性抗體結(jié)合的細胞被注入流式細胞儀并收集數(shù)據(jù)。隨后，將偶聯(lián)細胞和目標抗體注射到儀器中，生成標準曲線后，可以定量測定表面受體的總表達量。

第二個sub-assays，細胞應(yīng)與未標記的靶抗體結(jié)合，但某些靶抗體應(yīng)單獨標記。注入未標記目標抗體結(jié)合的細胞，并記錄數(shù)據(jù)。隨后，注射標記的目標抗體，此時，只有自由受體會結(jié)合標記的抗體。使用標準曲線，可以確定自由受體的數(shù)量。

值得注意的是，將這兩種sub-assays結(jié)合起來時，就有可能計算出一個稱為受體占用率的值。隨后，該值可以轉(zhuǎn)化為表面親和值，如果這個實驗長時間進行，則可以計算出間接的動力學(xué)值。

OpenSPR如何在動力學(xué)檢測中革新流式細胞術(shù)？

雖然間接測量動力學(xué)值是了解生物治療藥物和受體之間發(fā)生的結(jié)合實驗的一個很好的起點，但是直接測量要更全面和準確。在完成流式細胞術(shù)的高通量篩選后，我們已經(jīng)確定了并獲得了明顯的親和力。為了使您的研究更接近文章，表面等離子體共振(SPR)將提供一個簡單、定量和無需標記的方法，直接測量待測定物和表面受體的kon, koff和KD值。

流式細胞術(shù)是在體外用完整的細胞和純化的抗體進行的，而體外SPR動力學(xué)檢測建議將純化或獲得純化的受體固定在傳感器芯片上 。當與流式細胞儀結(jié)合使用時，SPR是一個突出的補充，使文章數(shù)據(jù)更強的先進工具 。

市面上一些其他技術(shù)也可以提供定量結(jié)合數(shù)據(jù)，包括ITC, MST和BLI以及熒光技術(shù)。然而，這些技術(shù)通常需要大量的樣本，需要標記，不能提供足夠的信息和/或需要大量的資本支出。而表面等離子體共振(SPR)幾十年來一直是獲得定量結(jié)合動力學(xué)數(shù)據(jù)的金標準。重要的是，OpenSPR做為 突破零技術(shù)門檻 的下一代SPR技術(shù)，用戶操作友好、低維護且易操作，正在被全球數(shù)百名研究人員使用，實現(xiàn)在自己的實驗臺完成SPR實驗，可以輕松獲得您需要的高質(zhì)量數(shù)據(jù)，從而加快您的研究和發(fā)表文章速度。

SPR不僅對發(fā)表文章是必要的，而且對許多醫(yī)學(xué)領(lǐng)域和醫(yī)學(xué)研究的進展也是必要的，如下文所示，依賴SPR數(shù)據(jù)的文章呈顯著增長趨勢 。

OpenSPR分子互作儀對流式動力學(xué)檢測革新的獨特性

 創(chuàng)新LSPR技術(shù)--- 檢測不受溫度、緩沖液折射率影響

易操作---1-2小時快速掌握

寬范圍檢測---pM-nM

 多參數(shù)檢測---Ka、Kd、KD、EC50、蛋白濃度測定

 低成本--- 實時無標記、芯片可再生

高性能---大于90Da的分子即可