熒光分光光度法在克拉維酸聚合物

及其他熒光雜質(zhì)含量測定上的應(yīng)用

天津港東科技股份有限公司? 應(yīng)用分析部

摘要：

阿莫西林克拉維酸鉀為阿莫西林與克拉維酸的復(fù)方制劑，前者是廣譜青霉素但不耐青霉素酶，后者為β-內(nèi)酰胺酶抑制劑，具有廣譜抑酶作用，合用可提高阿莫西林抗產(chǎn)酶耐藥菌的作用，因此研究阿莫西林克拉維酸鉀片中克拉維酸聚合物及其他熒光雜質(zhì)含量具有實際意義。

本文以測定阿莫西林克拉維酸鉀片（2:1）中克拉維酸鉀及其他熒光雜質(zhì)含量為例，依據(jù)《阿莫西林克拉維酸鉀片（2:1）一致性評價質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》，應(yīng)用港東F-280型熒光分光光度計對拉維酸鉀及其他熒光雜質(zhì)含量進行測定。結(jié)果證明此方法操作簡便，結(jié)果準(zhǔn)確。

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關(guān)鍵詞：阿莫西林克拉維酸鉀片（2:1）；克拉維酸鉀及其他熒光雜質(zhì)；分子熒光

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一、原理：

樣品經(jīng)溶解后調(diào)節(jié)pH至5.0，其中克拉維酸聚合物和其他熒光雜質(zhì)已經(jīng)形成了穩(wěn)定的聚合物，過濾后，用分子熒光分光光度計檢測其在激發(fā)波長365nm、發(fā)射波長440nm處的熒光強度，以此計算克拉維酸聚合物及其他熒光雜質(zhì)在阿莫西林克拉維酸鉀片中所占比例。

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二、實驗條件：

1、儀器及附件：

?? 天津港東 F-280型熒光分光光度計????? ?1臺

?? 熒光石英比色皿??? ???????????????????2個

?? 超聲波清洗機? ???????????????????????1臺

2、分析條件：

激發(fā)波長：365nm

發(fā)射波長：440nm

3、藥品試劑：

??? 氫氧化鈉（分析純）、磷酸二氫鈉（分析純）、硫酸奎寧（分析純）、硫酸（分析純）、蒸餾水。

4、溶液配制：

（1）氫氧化鈉溶液（1mol/L）

精密稱取4.0000g氫氧化鈉粉末置于100ml小燒杯中，取少量的蒸餾水將其溶解，轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶內(nèi)，用蒸餾水定容。

（2）磷酸二氫鈉溶液（0.1mol/L）

精密稱取3.9000g磷酸二氫鈉粉末（NaH2PO4·2H2O分子量156）置于100ml小燒杯中，取少量的蒸餾水將其溶解，轉(zhuǎn)移至250ml容量瓶內(nèi)，用蒸餾水定容。

（3）硫酸溶液（0.5mol/L）

用移液管量取13.5ml濃硫酸置于放有少量蒸餾水的100ml小燒杯中，待其放熱結(jié)束，轉(zhuǎn)移至500ml容量瓶內(nèi)，用蒸餾水定容。

（4）硫酸奎寧對照品溶液（0.42μg/ml）

① 硫酸奎寧溶液（5000μg/ml）

精密稱取0.2500g硫酸奎寧粉末置于100ml小燒杯中，取少量的0.5mol/L硫酸溶液將其溶解，轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶內(nèi)，用0.5mol/L硫酸溶液定容。

② 硫酸奎寧溶液（50μg/ml）

用移液管量取1ml 5000μg/ml硫酸奎寧溶液，置于100ml容量瓶中，用0.5mol/L硫酸溶液定容。

③ 硫酸奎寧對照品溶液（0.42μg/ml）

用移液管量取0.84ml 50μg /ml硫酸奎寧溶液，置于100ml容量瓶中，用0.5mol/L硫酸溶液定容。

（5）供試品溶液（1mg/ml）

取本品若干顆，置于瑪瑙研缽中研磨成細(xì)粉，過100目篩子，混勻，取篩出的細(xì)粉適量，精密稱取0.1500g（本品中阿莫西林與克拉維酸鉀的質(zhì)量比為2:1，所稱取細(xì)粉應(yīng)約含克拉維酸鉀25mg），置于100ml小燒杯中，取少量的0.1mol/L磷酸二氫鈉溶液將其溶解，轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶中，用0.1mol/L磷酸二氫鈉溶液定容，用漏斗進行過濾，取其濾液。

5、其它：

分析天平（0.0001g）、瑪瑙研缽、100目篩子、稱量紙若干、pH試紙（pH1～14）、50ml容量瓶、250ml容量瓶、500ml容量瓶、100ml容量瓶、1ml移液管、5ml移液管、10ml移液管、10ml具塞刻度試管、比色管架、漏斗、100ml小燒杯、玻璃棒若干、擦鏡紙等。

三、實驗方法

1、供試品樣品制備

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2、對照品樣品制備 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ??

3、空白溶液制備

供試品空白溶液：0.1mol/L磷酸二氫鈉溶液（pH=5.0）。

對照品空白溶液：0.5mol/L硫酸溶液。

四、測定結(jié)果

應(yīng)用港東F-280型熒光分光光度計的“波長掃描”模塊，分別讀取待測溶液的熒光強度，根據(jù)計算公式得到化妝品樣品中總硒的含量。

??? 儀器設(shè)置參數(shù)：

激發(fā)波長

365nm

發(fā)射起始波長

200nm

激發(fā)狹縫

10.0nm

PMT電壓

400V

發(fā)射終止波長

760nm

發(fā)射狹縫

10.0nm

掃描速度

1200nm/min

靈敏度

0.1s

增益

1

以下為港東F-280型熒光分光光度計測定阿莫西林克拉維酸鉀片（2:1）中克拉維酸聚合物及雜質(zhì)的發(fā)射譜圖和計算樣品中克拉維酸聚合物及雜質(zhì)含量的計算公式。

?? 波長掃描測試譜圖：

注：紅色譜圖為供試品參比溶液；黑色譜圖為對照品參比溶液；藍色譜圖為對照品溶液；綠色譜圖為供試品溶液。

?? 計算公式：

式中：Fx為供試品溶液熒光強度；

????? Fs為硫酸奎寧對照品溶液熒光強度；

????? Cx為供試品溶液中克拉維酸的濃度，mg/mL；

????? Cs為對照品溶液中硫酸奎寧的濃度，μg/mL；

????? 0.42為對照品溶液中硫酸奎寧的理論濃度，μg/mL。

本實驗標(biāo)準(zhǔn)樣品中克拉維酸聚合物及其他熒光雜質(zhì)含量為5%，樣品1中克拉維酸聚合物及其他熒光雜質(zhì)含量為0.606%，樣品2中克拉維酸聚合物及其他熒光雜質(zhì)含量為0.567%，未超過標(biāo)準(zhǔn)樣品中的鋁鹽含量，故檢測合格。

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五、結(jié)論

根據(jù)《阿莫新林克拉維酸鉀片（2:1）一致性評價質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》所述方法，進行樣品測試，實驗結(jié)果表明，供試品溶液的熒光強度（Fx）小于對照品溶液的熒光強度（Fs）（5%w/w,以克拉維酸含量計算），故符合阿莫新林克拉維酸鉀片（2:1）一致性評價質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

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