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用恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行生鮮牛乳中體細(xì)胞的測(cè)定

日期：2019-04-17 / 人氣：

用恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行生鮮牛乳中體細(xì)胞的測(cè)定
1.原理     將測(cè)試的生鮮牛乳涂抹在載玻片上成樣膜，干燥、染色，顯微鏡下對(duì)細(xì)胞核可被亞甲基藍(lán)清晰染色的細(xì)胞計(jì)數(shù)。 2.試劑     除非另有說(shuō)明，在分析中僅使用化學(xué)純和蒸餾水。 2.1乙醇，95%。 2.2四氯乙烷(Cz Hz Cl 4) 或三氯乙烷(C zHy Cl 3) 。 2.3亞甲基藍(lán)(Ci6HisCIN3S 3H2O) 。 2.4冰醋酸(CH3COOH) 。 2.5硼酸(H3BO3)。 3.儀器 3.1顯微鏡：放大倍數(shù)x500或 1000，帶刻度目鏡、測(cè)微尺和機(jī)械臺(tái)。 3.2微量注射器：容量0.01mLc 3.3載玻片：具有外槽圈定的范圍，可采用血球計(jì)數(shù)板。 3.4水浴鍋：恒溫65℃ 5℃。 3.5水浴鍋：恒溫35℃ 5℃。 3.6電爐：加熱溫度40℃ 10℃。 3.7砂芯漏斗：孔徑 10pm。 3.8干發(fā)型吹風(fēng)機(jī)。 3.9恒溫培養(yǎng)箱：恒溫40℃~45℃。 4.染色溶液制備     在250mL三角瓶中加人54.0mL乙醇和40.0mL四氯乙烷，搖勻；在65℃水浴鍋中加熱3min， 取出后加入0.6g亞甲基藍(lán)， 仔細(xì)混勻； 降溫后， 置人冰箱中冷卻至4℃；取出后，加入6.0mL冰醋酸，混勻后用砂芯漏斗過(guò)濾；裝人試劑瓶，常溫貯存。
4.1采集的生鮮牛乳應(yīng)保存在2℃~6℃條件下。若6h內(nèi)未測(cè)定，應(yīng)加硼酸防腐。硼酸在樣品中的濃度不大于0.6g/100mL，貯存溫度2℃~6℃，貯存時(shí)間不超過(guò)24h。 4.2將生鮮牛乳樣在35℃水浴鍋 中加熱5min， 搖勻后冷卻至室溫。 4.3用乙醇將載玻片清洗后，用無(wú)塵鏡頭紙擦干，火焰烤干，冷卻。 4.4用無(wú)塵鏡頭紙擦凈微量注射器針頭后抽取0.01mL試樣，用無(wú)塵鏡頭紙擦干微量注射器針頭外殘樣。將試樣平整地注射在有外圍的載玻片上，立刻置于恒溫培養(yǎng)箱中，水平放置5mmin， 形成均勻厚度樣膜。在電爐 上烤干， 將載玻片上干燥樣膜浸入染色溶液 中，計(jì)時(shí)10min， 取出后涼干。若室內(nèi)濕度大， 則可用干發(fā)型吹風(fēng)機(jī)吹干； 然后， 將染色的樣膜浸入水中洗去剩余的染色溶液，干燥后防塵保存。 5.測(cè)定 5.1將載玻片固定在顯微鏡的載物臺(tái)上，用自然光或?yàn)樵龃笸干涔鈴?qiáng)度用電光源、聚光鏡頭、油浸高倍鏡。 5.2單向移動(dòng)機(jī)械臺(tái)對(duì)逐個(gè)視野中載玻片上染色體細(xì)胞計(jì)數(shù)，明顯落在視野內(nèi)或在視野內(nèi)顯示一半以上形體的體細(xì)胞被用于計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)的體細(xì)胞不得少于400個(gè)。

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