用轉(zhuǎn)座子進(jìn)行全面的基因篩選是系統(tǒng)鑒定抗性基因的新方法。本研究旨在利用該技術(shù)鑒定食管鱗狀細(xì)胞癌中的候選放射抗性基因。轉(zhuǎn)座子是一種堿基序列，可以隨機轉(zhuǎn)換到基因組中的另一個位置。通過在轉(zhuǎn)座子中插入巨細(xì)胞病毒啟動子作為轉(zhuǎn)錄激活因子，新位置的下列基因變得過表達(dá)，位于轉(zhuǎn)座子插入位點的基因被下調(diào)。因此，可以獲得使用轉(zhuǎn)座子方法具有差異過表達(dá)或下調(diào)基因的各種轉(zhuǎn)座子標(biāo)記的細(xì)胞。在轉(zhuǎn)座子標(biāo)記的細(xì)胞照射后，可以選擇候選放射抗性基因以檢測轉(zhuǎn)座子在存活的細(xì)胞中的位置。
     
圖2. MT-CO1下調(diào)細(xì)胞的放射抗性。 在7-Gy照射后1,3,5,7和9天測量細(xì)胞存活率。 在第5,7和9天，MT-CO1下調(diào)細(xì)胞的存活率顯著更高（P 0.001）。 誤差線表示平均值的標(biāo)準(zhǔn)偏差。 MT-CO1，細(xì)胞色素c氧化酶1; RRCs，抗輻射細(xì)胞。
  照射后的Caspase-3活性。 照射5-Gy后，將親本（TE4）細(xì)胞和RRC（MT-CO1-下調(diào)細(xì)胞）與比色底物DEVD-pNA一起溫育24小時。 Caspase-3活性測量為405nm處的吸光度，并且發(fā)現(xiàn)在照射后親本細(xì)胞中的Caspase-3活性更高（* P 0.001）。 誤差線表示平均值的標(biāo)準(zhǔn)偏差。 MT-CO1，細(xì)胞色素c氧化酶1; RRCs，抗輻射細(xì)胞。
 
結(jié)果：共檢測到11個基因作為候選放射抗性基因。細(xì)胞色素c氧化酶1（MT-CO1）是一種通過激活caspase級聯(lián)參與細(xì)胞凋亡的酶，是鑒定的候選基因之一。MT-CO1誘導(dǎo)的放射抗性的下調(diào)通過抑制放射抗性食管癌細(xì)胞中半胱天冬酶級聯(lián)的激活而發(fā)生。
 
文章來源：
Downregulation of cytochrome c oxidase 1 induced radioresistance in esophageal squamous cell carcinoma