利用相位差顯微鏡觀察-細(xì)胞存活測定實(shí)驗(yàn)步驟

細(xì)胞存活、死亡之測定法
一、 相位差顯微鏡（phase-contrastmicroscope）
利用相位差顯微鏡，觀察給藥前后細(xì)胞型態(tài)，以了解細(xì)胞經(jīng)藥物處理后
型態(tài)的變化，評估藥物對細(xì)胞狀態(tài)的影響。
二、 細(xì)胞存活率之測定：MTT 還原分析法（3-（4,5-dimethylthianol-2-yl）-2,5
diphenyltetrazolium bromide reduction assay）

一、原理
正常健康的細(xì)胞，其細(xì)胞粒腺體內(nèi)膜的琥珀酸去氫醣（succinate
dehydrogenase）具有將 MTT（黃色）還原為 MTT-formazan（紫色）的能
力。而紫色顏色的深淺程度可代表還原能力的強(qiáng)弱，即琥珀去氫醣的活性，同時也反應(yīng)粒腺體的生理狀況。
由于粒腺體是細(xì)胞內(nèi)對環(huán)境因素最為敏感，因此粒腺體的生理狀況可代表細(xì)胞的生理狀況。當(dāng)還原能力強(qiáng)時，表示克氏循（Kreb’s cycle）環(huán)進(jìn)行速率快，可產(chǎn)生較多的能量供細(xì)胞使用，故可代表細(xì)胞的健康情形
良好

二、試劑
1. 5mg/ml MTT 溶液（溶劑：1X PBS），避光 4℃保存。
2. Dimethyl sulfoxide（DMSO）：Sigama

三、
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 每孔留下 350μl 的留胞培養(yǎng)液，加入 35μl MTT 溶液（黃色），避
光并靜置室溫下反應(yīng) 1 小時。
2. 移除含有 MTT 的細(xì)胞培養(yǎng)液，加入 350μl DMSO 以溶解紫色顆粒。
待紫色顆粒完全溶解后，每孔各取 125μl 的紫色溶液置入 96-well
RIA/EIA plate 中，設(shè)定波長為 570 nm（630 nm 當(dāng)作參考波長），測其
吸光值。吸光值越高，表示 MTT-formazan 產(chǎn)量越高，即代表細(xì)胞之
存活率越高。
3. 計(jì)算細(xì)胞細(xì)胞存活率＝樣品吸光值 / 控制組吸光值 × 100﹪