顯微鏡數(shù)碼圖像的分辨率首先取決于光學(xué)圖像的分辨率
從顯微鏡獲得的數(shù)碼圖像的分辨率首先取決于光學(xué)圖像的分辨率。
分辨極限的定義是:樣品上兩個(gè)獨(dú)立的對(duì)象在光學(xué)圖像中也可清楚分開
所必需的最小距離。在顯微成像中,
數(shù)碼顯微圖像的分辨率進(jìn)一步取決于并限制于構(gòu)成CCD 芯片的單個(gè)
光電二極管的物理大小
相機(jī)像素大小決定了你需要利用放大多少倍的顯微鏡以獲得最高分
辨率的數(shù)碼圖像。讓我們利用一個(gè)實(shí)例來(lái)了解怎樣根據(jù)你所用的相機(jī)來(lái)
計(jì)算所需要的光學(xué)放大倍數(shù)。假如我們所用的物鏡的NA是1.4 ,那么在
535nm 波長(zhǎng)的發(fā)射光下獲取綠熒光圖像的光學(xué)圖像中的分辨率極限為0.2
μm
我們假設(shè)使用的相機(jī)在技術(shù)數(shù)據(jù)表中顯示的像素大小是6.45μm 那
么我們需要將樣品上最小的可辨別的距離(0. 25m)在CCD 芯片上放大
到至少19.4μm ,占用3 個(gè)光電二極管(6.45X3=19.4 ),得到的結(jié)果
是96倍。為了得到這一放大倍數(shù),我們可以單獨(dú)使用一個(gè)l00x 1.4NA
的物鏡或者使用60 X1.4NA 的物鏡與1.5X的附加放大設(shè)備組合。顯微鏡
制造商一般都會(huì)在研究級(jí)別的顯微鏡上生產(chǎn)帶有可選范圍在1.2X-2.OX
的附加放大設(shè)備(稱為光轉(zhuǎn)換器或放大轉(zhuǎn)換器)。但是,附加的放大倍
數(shù)也可以在相機(jī)上添加一個(gè)能夠放大的鏡頭來(lái)實(shí)現(xiàn)。
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