固定體積培養(yǎng)介質(zhì)細(xì)胞懸浮培養(yǎng)實驗圖像顯微鏡

  懸浮培養(yǎng)的類型
  分批培養(yǎng)
分批培養(yǎng)指在固定體積的培養(yǎng)介質(zhì)中進(jìn)行的細(xì)胞懸浮培養(yǎng)。在培養(yǎng)
過程中？細(xì)胞分裂和細(xì)胞生長使得懸浮培養(yǎng)物的生物量不斷增加。當(dāng)培
養(yǎng)環(huán)境(可利用的營養(yǎng)和氧氣)中出現(xiàn)限制因子時，細(xì)胞停止生長，生物
量便不再增加。

  培養(yǎng)時間的模式曲線
  ①滯后期：此期為細(xì)胞分裂做準(zhǔn)備。
  ②指數(shù)期：細(xì)胞分裂速度最快。
  ③線形期：細(xì)胞分裂速度減慢，細(xì)胞伸長生長速度增加。
  ④減速期：細(xì)胞分裂和細(xì)胞伸長速率都減小。
  ⑤穩(wěn)定期：細(xì)胞數(shù)目和大小保持恒定。
當(dāng)細(xì)胞被轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基中開始培養(yǎng)時，細(xì)胞就處于滯后期，這
是分批培養(yǎng)的最開始階段，此時期的細(xì)胞還沒有分裂。滯后期的細(xì)胞可
用來分析特定代謝物的合成和某種生理活動的速率。緊跟滯后期的是細(xì)
胞分裂期(即指數(shù)期)，此時期持續(xù)的時間很短，指數(shù)期時，每單位生物
量濃度的生物量增加是一定的且是可以測量的。生物量通常是指每毫升
培養(yǎng)物中的細(xì)胞數(shù)目。一般地，在細(xì)胞分裂到3—4代后，細(xì)胞生長開始
降低，最后，細(xì)胞數(shù)目達(dá)到穩(wěn)定期，此時細(xì)胞干重開始下降。穩(wěn)定期是
分批培養(yǎng)中細(xì)胞生長周期的最后階段，此時生物量和細(xì)胞數(shù)量都沒見有
明顯的增加。培養(yǎng)時可以通過頻繁(周期為2—3d)地進(jìn)行亞培養(yǎng)而使細(xì)
胞維持在指數(shù)生長期。由于細(xì)胞能利用胞內(nèi)的儲備物和死亡細(xì)胞所釋放
的可再利用代謝物，所以細(xì)胞可以存活幾天。穩(wěn)定期細(xì)胞的穩(wěn)定性取決
于生長限制因子的種類和特點(如因氮缺乏而達(dá)穩(wěn)定期的細(xì)胞的存活時
間比碳缺乏的要長)。處于穩(wěn)定期的細(xì)胞被轉(zhuǎn)移人新的培養(yǎng)基進(jìn)行繼代
培養(yǎng)后，細(xì)胞就依次通過滯后期、很短暫的指數(shù)生長期、相對生長速率
下降時期，接著又再次進(jìn)入穩(wěn)定期。進(jìn)入末期前，細(xì)胞的體積在增大。
一般按照慣例，每次繼代培養(yǎng)都是開始于相對較高的細(xì)胞密度，所以再
次進(jìn)入穩(wěn)定期前，細(xì)胞只進(jìn)行有限的分裂(細(xì)胞數(shù)目加倍)。

一般來說，細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的目的是獲得生長速率較快、均一的細(xì)胞
，而且所有細(xì)胞都是活的。在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基中頻繁地進(jìn)行繼代培養(yǎng)，獲
得的細(xì)胞就可以同時具有這些特點。如果懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞是用于做實驗
，則繼代培養(yǎng)的時間間隔不要超過一周。

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