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一次完整的流式細(xì)胞分析包括：細(xì)胞樣本制備，流式細(xì)胞儀操作和數(shù)據(jù)分析。細(xì)胞樣品制備在流式分析過程中的重要性毋庸置疑，直接影響數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確度及實驗的整體進(jìn)展。然而傳統(tǒng)細(xì)胞樣本制備過程中，離心可能對細(xì)胞造成諸多缺陷，例如：對細(xì)胞造成擠壓和破壞；不可控的細(xì)胞丟失使得原始樣本中的細(xì)胞群比列產(chǎn)生偏差，導(dǎo)致數(shù)據(jù)嚴(yán)重失真，讓研究者可能得到不客觀的數(shù)據(jù)分析和診斷結(jié)果，此外，傳統(tǒng)離心法還顯著受到操作者差異性的影響，并且需要消耗大量的人力和物力。
因此，想要獲得更加科學(xué)的實驗數(shù)據(jù)，邁入可定量、可重復(fù)性的流式細(xì)胞分析新境界，提升細(xì)胞制備過程是關(guān)鍵所在。
DA-Cell微滴陣列樣品前處理系統(tǒng)作為新一代樣品前處理系統(tǒng)，利用重力與層流的效應(yīng)，可以在不用離心的情況下用非常輕柔和科學(xué)的方式實現(xiàn)對細(xì)胞，微珠等懸浮樣品的清洗操作。其在細(xì)胞制備過程中展現(xiàn)出來的優(yōu)勢，是目前傳統(tǒng)離心方法所無法比擬的。
Adicet Bio是一家專注于細(xì)胞免疫治療研發(fā)的公司，在 2016年與再生元(Regeneron Pharmaceuticals)簽訂了一項長達(dá)5年的合作協(xié)議，旨在實體腫瘤和血液腫瘤等多個項目開展合作(包括同種異體細(xì)胞療法)。為了能夠精確接合并殺死腫瘤細(xì)胞，Adicet Bio正在開發(fā)基于 T細(xì)胞的工程化嵌合抗原受體(CAR)和T細(xì)胞受體(TCR)，以特異性靶向細(xì)胞內(nèi)外抗原，為多種血液腫瘤和實體腫瘤提供多元化的臨床候選產(chǎn)品。
T細(xì)胞(ICP)產(chǎn)品在體外制備過程包括以下步驟：
1. 從健康捐贈者身上分離提取 T細(xì)胞
2. 對 T細(xì)胞進(jìn)行基因改造
3. T細(xì)胞擴(kuò)增
4. 擴(kuò)增后的 T細(xì)胞產(chǎn)品存入細(xì)胞銀行，以備后續(xù)使用
圖1. T細(xì)胞產(chǎn)品體外制備流程
Adicet Bio公司于第2, 3, 4步驟采用基于流式細(xì)胞術(shù)的分選方案對不同的捐贈者進(jìn)行樣本選擇和質(zhì)控，以確保后續(xù)用于治療的產(chǎn)品符合要求。 T在人體血液中的含量非常低，如果在樣本制備過程中捐贈者的細(xì)胞丟失嚴(yán)重，可能會導(dǎo)致研究人員對結(jié)果誤判。為了避免這種情況，并獲取到更真實和科學(xué)的流式數(shù)據(jù)，挑選到最合適的樣本，Adicet Bio公司研究人員在分選方案的細(xì)胞樣本制備過程中使用了DA-Cell微滴陣列樣品前處理系統(tǒng)。
圖2. 捐贈者的樣本含有不同比例的 T細(xì)胞
圖3. 基于流式細(xì)胞術(shù)的樣本分選方案
結(jié)果一：DA-Cell可提升流式數(shù)據(jù)質(zhì)量
高質(zhì)量的流式細(xì)胞數(shù)據(jù)可以幫助研究人員正確分選捐贈者樣本和質(zhì)控，減少因假陽性結(jié)果產(chǎn)生的誤判。
結(jié)果二：DA-Cell使實驗重復(fù)性高
DA-Cell自動化程度高，避免了人工操作的誤差，極大的提升了實驗的可重復(fù)性，即使樣本稀有，也可獲得較高的重復(fù)性。
結(jié)果三：：DA-Cell的數(shù)據(jù)穩(wěn)定性程度高
細(xì)胞樣本無論經(jīng)過DA-Cell幾次處理，細(xì)胞亞群的比例保持一致，最大程度避免數(shù)據(jù)出現(xiàn)偏差。
結(jié)果四：DA-Cell節(jié)省大量時間
DA-Cell 自動化程度高，僅需要傳統(tǒng)離心方法的10-20%的時間，從而提升實驗效率。
總結(jié)
DA-Cell 微滴陣列樣品前處理系統(tǒng)顛覆了傳統(tǒng)的離心方式，其原理是利用重力和流體力學(xué)的層流效應(yīng)，在非離心的情況下，用非常輕柔和科學(xué)的方式實現(xiàn)對細(xì)胞、微珠等懸浮樣品的清洗操作。與傳統(tǒng)的離心方式下相比，DA-Cell 展現(xiàn)了巨大的優(yōu)勢：
1. 杜絕因傳統(tǒng)離心法造成的數(shù)據(jù)偏差、得到更加科學(xué)的結(jié)果
由于不同細(xì)胞的大小、密度、形態(tài)等各不相同，它們在傳統(tǒng)離心法處理過程中丟失的比例各不相同，保留的比例已經(jīng)偏離原始的真實值，會導(dǎo)致結(jié)果的偏差、甚至錯誤。而 DA-Cell 方法細(xì)胞丟失很少，可最大程度地保留原始的細(xì)胞比例，有助于得到更加真實、科學(xué)的結(jié)果。
△ 傳統(tǒng)離 法只保留20-30%細(xì)胞樣品，DA-Cell可保留95%以上的細(xì)胞樣品
△ 相較傳統(tǒng)離 式，DA-Cell可呈現(xiàn)更強(qiáng)的熒光訊號與完整細(xì)胞形態(tài)
△ 離 過程對細(xì)胞所造成的擠壓會嚴(yán)重影響細(xì)胞的 理功能與蛋 表達(dá)
2. 節(jié)省時間、提升效率和通量
傳統(tǒng)離心與DA-Cell方法制備細(xì)胞樣本流程比較
傳統(tǒng)離心法每次清洗都有多個步驟，包括：加液、重懸、離心、去上清等，如果清洗 2-4 次就需要 20-40 分鐘，而 DA-Cell 方法則僅需要 2-6 分鐘，僅需要傳統(tǒng)方法10-20%的時間。
3. 樣品處理過程非常溫和，杜絕壓力和細(xì)胞破損
傳統(tǒng)細(xì)胞、微珠等懸浮樣品的制備都必須通過離心，離心力達(dá)到數(shù)百 g 或數(shù)千 g（即細(xì)胞需要承受相當(dāng)于自身重量的數(shù)百或數(shù)千倍的壓力），這對細(xì)胞狀態(tài)的影響極大，甚至產(chǎn)生破碎；而 DA-Cell 僅利用細(xì)胞自身的重力和流體力學(xué)的層流效應(yīng)既可以實現(xiàn)對樣品的制備過程，對細(xì)胞沒有任何脅迫，所以可以顯著減少細(xì)胞破損。
△ 比較PBMC樣品經(jīng)過4X的DA-Cell處理 vs 4X的離心處理對細(xì)胞活率的影響
△ DA-Cell在活細(xì)胞的比率上顯著高過傳統(tǒng)離心法
△ 數(shù)據(jù)顯示傳統(tǒng)離心法相較DA-Cell容易造成更多的細(xì)胞損傷，甚至細(xì)胞死亡
4. 減少細(xì)胞脅迫、保持最原始的蛋白和生物標(biāo)志物表達(dá)水平
減少細(xì)胞脅迫、保持最原始的蛋白和生物標(biāo)志物表達(dá)水平傳統(tǒng)離心的方式會對細(xì)胞等懸浮樣品產(chǎn)品大量脅迫，這會影響很多基因的表達(dá)水平，并最終很可能影響科學(xué)家所要觀察的蛋白和生物標(biāo)志物，從而產(chǎn)生有偏差的數(shù)據(jù)。DA-Cell 微滴陣列樣品前處理系統(tǒng)對細(xì)胞的壓力和干擾很小，可以最大程度降低對蛋白和生物標(biāo)志物表達(dá)水平的干擾。
△ 數(shù)值為正數(shù)代表染色指數(shù)較高，使用DA-Cell后，蛋白染色度相對增加
△ 有效觀測蛋白和生物標(biāo)志物，實驗結(jié)果更加直觀
5. 提升流式分析數(shù)據(jù)結(jié)果
DA-Cel可以在不用離心的情況下用非常輕柔和科學(xué)的方式實現(xiàn)對細(xì)胞進(jìn)行清洗，所獲得的數(shù)據(jù)即使進(jìn)行多色流式分析，也可以輕易得到可靠的細(xì)胞分群結(jié)果。
樣品分別在傳統(tǒng)離心法與DA-Cell處理過后，在16色熒光流式分析的比較
△ HSC/iNKT ：DA-Cell因可減少細(xì)胞與訊號的丟失，可讓實驗者看到稀有細(xì)胞亞群，傳統(tǒng)離 法則無
△ GDT/MAIT：DA-Cell可顯著的提升細(xì)胞亞群間界線，傳統(tǒng)離 法就因過多細(xì)胞碎 易造成區(qū)分困難
6. 全自動操作、更好的可重復(fù)性、避免人工導(dǎo)入的偏差
傳統(tǒng)離心法的人工因素很多，由于不同人的操作手法不一樣、同一個人在不同時間的操作手法也難以保持一致，因此實驗可重復(fù)性較差；而 DA-Cell 是全自動操作，避免人工導(dǎo)入的誤差，可極大提升實驗的可重復(fù)性。
魔鬼藏在細(xì)節(jié)里，細(xì)節(jié)決定成敗，DA-Cell可在細(xì)胞處理的細(xì)節(jié)上改善數(shù)據(jù)的質(zhì)量，使流式細(xì)胞分析邁入可定量，可重復(fù)性的新境界，從而提升細(xì)胞免疫治療的精準(zhǔn)監(jiān)控，
因此，想要獲得更加科學(xué)的實驗數(shù)據(jù)，邁入可定量、可重復(fù)性的流式細(xì)胞分析新境界，提升細(xì)胞制備過程是關(guān)鍵所在。
DA-Cell微滴陣列樣品前處理系統(tǒng)作為新一代樣品前處理系統(tǒng)，利用重力與層流的效應(yīng)，可以在不用離心的情況下用非常輕柔和科學(xué)的方式實現(xiàn)對細(xì)胞，微珠等懸浮樣品的清洗操作。其在細(xì)胞制備過程中展現(xiàn)出來的優(yōu)勢，是目前傳統(tǒng)離心方法所無法比擬的。
Adicet Bio是一家專注于細(xì)胞免疫治療研發(fā)的公司，在 2016年與再生元(Regeneron Pharmaceuticals)簽訂了一項長達(dá)5年的合作協(xié)議，旨在實體腫瘤和血液腫瘤等多個項目開展合作(包括同種異體細(xì)胞療法)。為了能夠精確接合并殺死腫瘤細(xì)胞，Adicet Bio正在開發(fā)基于 T細(xì)胞的工程化嵌合抗原受體(CAR)和T細(xì)胞受體(TCR)，以特異性靶向細(xì)胞內(nèi)外抗原，為多種血液腫瘤和實體腫瘤提供多元化的臨床候選產(chǎn)品。
T細(xì)胞(ICP)產(chǎn)品在體外制備過程包括以下步驟：
1. 從健康捐贈者身上分離提取 T細(xì)胞
2. 對 T細(xì)胞進(jìn)行基因改造
3. T細(xì)胞擴(kuò)增
4. 擴(kuò)增后的 T細(xì)胞產(chǎn)品存入細(xì)胞銀行，以備后續(xù)使用
圖1. T細(xì)胞產(chǎn)品體外制備流程
Adicet Bio公司于第2, 3, 4步驟采用基于流式細(xì)胞術(shù)的分選方案對不同的捐贈者進(jìn)行樣本選擇和質(zhì)控，以確保后續(xù)用于治療的產(chǎn)品符合要求。 T在人體血液中的含量非常低，如果在樣本制備過程中捐贈者的細(xì)胞丟失嚴(yán)重，可能會導(dǎo)致研究人員對結(jié)果誤判。為了避免這種情況，并獲取到更真實和科學(xué)的流式數(shù)據(jù)，挑選到最合適的樣本，Adicet Bio公司研究人員在分選方案的細(xì)胞樣本制備過程中使用了DA-Cell微滴陣列樣品前處理系統(tǒng)。
圖2. 捐贈者的樣本含有不同比例的 T細(xì)胞
圖3. 基于流式細(xì)胞術(shù)的樣本分選方案
結(jié)果一：DA-Cell可提升流式數(shù)據(jù)質(zhì)量
高質(zhì)量的流式細(xì)胞數(shù)據(jù)可以幫助研究人員正確分選捐贈者樣本和質(zhì)控，減少因假陽性結(jié)果產(chǎn)生的誤判。
結(jié)果二：DA-Cell使實驗重復(fù)性高
DA-Cell自動化程度高，避免了人工操作的誤差，極大的提升了實驗的可重復(fù)性，即使樣本稀有，也可獲得較高的重復(fù)性。
結(jié)果三：：DA-Cell的數(shù)據(jù)穩(wěn)定性程度高
細(xì)胞樣本無論經(jīng)過DA-Cell幾次處理，細(xì)胞亞群的比例保持一致，最大程度避免數(shù)據(jù)出現(xiàn)偏差。
結(jié)果四：DA-Cell節(jié)省大量時間
DA-Cell 自動化程度高，僅需要傳統(tǒng)離心方法的10-20%的時間，從而提升實驗效率。
總結(jié)
DA-Cell 微滴陣列樣品前處理系統(tǒng)顛覆了傳統(tǒng)的離心方式，其原理是利用重力和流體力學(xué)的層流效應(yīng)，在非離心的情況下，用非常輕柔和科學(xué)的方式實現(xiàn)對細(xì)胞、微珠等懸浮樣品的清洗操作。與傳統(tǒng)的離心方式下相比，DA-Cell 展現(xiàn)了巨大的優(yōu)勢：
1. 杜絕因傳統(tǒng)離心法造成的數(shù)據(jù)偏差、得到更加科學(xué)的結(jié)果
由于不同細(xì)胞的大小、密度、形態(tài)等各不相同，它們在傳統(tǒng)離心法處理過程中丟失的比例各不相同，保留的比例已經(jīng)偏離原始的真實值，會導(dǎo)致結(jié)果的偏差、甚至錯誤。而 DA-Cell 方法細(xì)胞丟失很少，可最大程度地保留原始的細(xì)胞比例，有助于得到更加真實、科學(xué)的結(jié)果。
△ 傳統(tǒng)離 法只保留20-30%細(xì)胞樣品，DA-Cell可保留95%以上的細(xì)胞樣品
△ 相較傳統(tǒng)離 式，DA-Cell可呈現(xiàn)更強(qiáng)的熒光訊號與完整細(xì)胞形態(tài)
△ 離 過程對細(xì)胞所造成的擠壓會嚴(yán)重影響細(xì)胞的 理功能與蛋 表達(dá)
2. 節(jié)省時間、提升效率和通量
傳統(tǒng)離心與DA-Cell方法制備細(xì)胞樣本流程比較
傳統(tǒng)離心法每次清洗都有多個步驟，包括：加液、重懸、離心、去上清等，如果清洗 2-4 次就需要 20-40 分鐘，而 DA-Cell 方法則僅需要 2-6 分鐘，僅需要傳統(tǒng)方法10-20%的時間。
3. 樣品處理過程非常溫和，杜絕壓力和細(xì)胞破損
傳統(tǒng)細(xì)胞、微珠等懸浮樣品的制備都必須通過離心，離心力達(dá)到數(shù)百 g 或數(shù)千 g（即細(xì)胞需要承受相當(dāng)于自身重量的數(shù)百或數(shù)千倍的壓力），這對細(xì)胞狀態(tài)的影響極大，甚至產(chǎn)生破碎；而 DA-Cell 僅利用細(xì)胞自身的重力和流體力學(xué)的層流效應(yīng)既可以實現(xiàn)對樣品的制備過程，對細(xì)胞沒有任何脅迫，所以可以顯著減少細(xì)胞破損。
△ 比較PBMC樣品經(jīng)過4X的DA-Cell處理 vs 4X的離心處理對細(xì)胞活率的影響
△ DA-Cell在活細(xì)胞的比率上顯著高過傳統(tǒng)離心法
△ 數(shù)據(jù)顯示傳統(tǒng)離心法相較DA-Cell容易造成更多的細(xì)胞損傷，甚至細(xì)胞死亡
4. 減少細(xì)胞脅迫、保持最原始的蛋白和生物標(biāo)志物表達(dá)水平
減少細(xì)胞脅迫、保持最原始的蛋白和生物標(biāo)志物表達(dá)水平傳統(tǒng)離心的方式會對細(xì)胞等懸浮樣品產(chǎn)品大量脅迫，這會影響很多基因的表達(dá)水平，并最終很可能影響科學(xué)家所要觀察的蛋白和生物標(biāo)志物，從而產(chǎn)生有偏差的數(shù)據(jù)。DA-Cell 微滴陣列樣品前處理系統(tǒng)對細(xì)胞的壓力和干擾很小，可以最大程度降低對蛋白和生物標(biāo)志物表達(dá)水平的干擾。
△ 數(shù)值為正數(shù)代表染色指數(shù)較高，使用DA-Cell后，蛋白染色度相對增加
△ 有效觀測蛋白和生物標(biāo)志物，實驗結(jié)果更加直觀
5. 提升流式分析數(shù)據(jù)結(jié)果
DA-Cel可以在不用離心的情況下用非常輕柔和科學(xué)的方式實現(xiàn)對細(xì)胞進(jìn)行清洗，所獲得的數(shù)據(jù)即使進(jìn)行多色流式分析，也可以輕易得到可靠的細(xì)胞分群結(jié)果。
樣品分別在傳統(tǒng)離心法與DA-Cell處理過后，在16色熒光流式分析的比較
△ HSC/iNKT ：DA-Cell因可減少細(xì)胞與訊號的丟失，可讓實驗者看到稀有細(xì)胞亞群，傳統(tǒng)離 法則無
△ GDT/MAIT：DA-Cell可顯著的提升細(xì)胞亞群間界線，傳統(tǒng)離 法就因過多細(xì)胞碎 易造成區(qū)分困難
6. 全自動操作、更好的可重復(fù)性、避免人工導(dǎo)入的偏差
傳統(tǒng)離心法的人工因素很多，由于不同人的操作手法不一樣、同一個人在不同時間的操作手法也難以保持一致，因此實驗可重復(fù)性較差；而 DA-Cell 是全自動操作，避免人工導(dǎo)入的誤差，可極大提升實驗的可重復(fù)性。
魔鬼藏在細(xì)節(jié)里，細(xì)節(jié)決定成敗，DA-Cell可在細(xì)胞處理的細(xì)節(jié)上改善數(shù)據(jù)的質(zhì)量，使流式細(xì)胞分析邁入可定量，可重復(fù)性的新境界，從而提升細(xì)胞免疫治療的精準(zhǔn)監(jiān)控，
