毓秀生物科技（上海）有限公司坐落于全國的科技、貿(mào)易、信息、金融和航運中心 上海。主要經(jīng)營范圍為生物技術(shù)的研究及推廣等。主要有免疫組化,病理組織包埋染色,病毒包裝,熒光定量Q-PCR檢測,人源化抗體,載體構(gòu)建,熒光原位雜交技術(shù)fish檢測,ELISA檢測,免疫熒光,CRISPR cas9 基因編輯等產(chǎn)品提供。 

  慢病毒包裝原理

  慢病毒表達質(zhì)粒包含了包裝、感染、穩(wěn)定整合宿主細胞基因組所需的遺傳信息，包裝輔助質(zhì)粒則提供了所有的轉(zhuǎn)錄、包裝和重組假病毒所需要的輔助蛋白。為產(chǎn)出高滴度的病毒顆粒，通常將表達質(zhì)粒和包裝質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染至包裝細胞中進行病毒的包裝。包裝好的假病毒顆粒分泌到細胞外培養(yǎng)液中。通過收集含病毒顆粒的上清，進行濃縮和純化可獲得高純度和高滴度的慢病毒。

  慢病毒包裝步驟

  1、轉(zhuǎn)染前1天，將293T細胞接種于10 CM培養(yǎng)皿中，加入15 mL含10％FBS的DMEM培養(yǎng)液，置37℃，5％CO2培養(yǎng)至約70－80％融合時，進行細胞轉(zhuǎn)染。

  2、轉(zhuǎn)染293T細胞

    （1）將慢病毒表達質(zhì)粒和包裝質(zhì)粒加入到Opti-MEM中，混勻。

   （2）將適量的Lipofectamine 2000 (invitrogen)加入到Opti-MEM中，混勻。

  （3）5分鐘后，將上述兩混合液混勻，室溫靜置20分種后，將混合液加入至培養(yǎng)皿中，前后左右晃動搖勻。置37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

  3、6小時后，換含10％FBS的DMEM培養(yǎng)液10mL。

  4、轉(zhuǎn)染48小時后，收集病毒上清，500g離心10分鐘，0.45 m濾器過濾。

  5、濃縮純化后，分裝，-80℃保存。